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PCR 技术在遗传性疾病方面的应用
作者:博日科技 时间:2018-05-11 10:31:32 浏览数:314

澳门赌博现金网 www.stratford4.com 遗传性的基因缺陷导致的疾病占人口总数 1%,是临床中不可忽视的一类疾病。按遗传方式与遗传物质的关系,遗传病总括可分为单基因遗传病,多基因遗传病及染色体异常遗传病。遗传病是由基因在性细胞的突变引起的。突变可分为以下几类:1.基因取代;2.缺插性点突变;3.非编码序列的点突变;4.DNA 重排。突变可以自发或诱导产生。

  作为基因突变的检测,实验室较易做的基因分析,PCR 方法使用主要可分为四种,分述如下。

  一、 PCR 结合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)探针法    

  其原理基于对已知有突变热点基因进行检测。用 PCR 扩增目的基因,将产物固定于尼龙膜上,针对各种常见突变点合成一系列正常及突变的寡核苷酸探针,将产物与探针杂交,利用非同源序列不能杂交的原理,可发现突变位点。

  二、 PCR 扩增特异等位基因   (PASA)

其原理为引物 3’末端的碱基决定 PCR 反应特异性及扩增效率,引物 3’末端碱基与模板相互配对时, 酶才能使引物延伸,   产生特异 PCRTaq扩增产物。因此设计引物,使突变位点位于 3’末端,根据特异性产物出现与否可判断样品中是否有基因突变存在。 

三、 限制性片断长度多态性分析(PCR--RFLP) 如果碱基突变位置与某种限制性内切酶识别位点相关,突变会产生新的或消除原有内切酶位点。选用特定的限制性内切酶消化PCR 产物,通过电泳酶切图谱可直接判断基因突变。  四、 单链构向多态分析(PCR—SSCP) 单链 DNA 呈复杂构象,空间结构依靠链内碱基配对维系,聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据电泳迁移率的改变敏感地发现突变的存在。

除基因分析外,还可使用定序克隆或序列分析决定突变,但在技术上及设备上均要求较高,不是一种实验室易实践的方法。

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