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如何选择RT-PCR试剂盒?
作者:博日科技 时间:2018-10-09 12:48:38 浏览数:364

RT-PCR 简介

RT-PCR是指将RNA 的反转录(RT)和cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。利用逆转录酶将RNA逆转录(RT)成cDNA(Complementary DNA),再以cDNA 为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR的常见应用包括基因检测、转录物变异检测,以及克隆和测序用cDNA模板制备。

 

图1 

RT-PCR 分类

一步法和两步法是两种最常用的RT-PCR方法。

图2 一步法原理

图3 两步法原理

一步法 VS 两步法

一步法RT-PCR相比较两步法RT-PCR,可大大简化工作流程、降低结果差异、同时将污染可能性降至最低。一步法适用大量样本的处理,可应用于高通量。与一步法RT-PCR相比,两步法RT-PCR的缺点包括多个步骤延长了工作流程、增加样本处理和操作步骤以及提高污染和结果变异的可能性。但是两步法可以获取大量的cDNA,同时可检测单个RNA样本中多个基因。

以下是博日一步法试剂盒介绍


 

博日BioRT Master 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)是博日科技(BIOER)专为以RNA模板在同一个反应体系中完成反转录和PCR而设计的,操作简单便捷。同时反应过程中不需要额外开管,也无需添加试剂,大大的提高了检测的通量,同时将污染的可能性降至最低。

产品特点

1、一管式反应将污染规避到最小


图4

2、采用专利配方的AMV酶,具有超高的热稳定,在高达60℃的反应温度可有效打开RNA二级结构,能应对普通逆转录酶无法应对的复杂模板。

图5

操作流程

实验案例

1、1μg 鼠肝总RNA 分别用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法),I公司一步法RT-PCR试剂盒和P公司一步法RT-PCR试剂盒在50℃和55℃进行RT-PCR后电泳结果。

 

图6

2、1μg 鼠肝总RNA 分别用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)进行RT-PCR后电泳结果。

图7

 

以下是博日两步法试剂盒介绍


 

博日BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(两步法)采用美国先进技术生产的高质量逆转录酶(AMV酶)和长片段高保真的Taq mix DNA聚合酶。AMV逆转录酶具有较高的热稳定性,其反应温度可达60℃,可以逆转录具有复杂二级结构的RNA模板(见图5),可逆转录得到长达12kb的cDNA。长片段高保真的Taq mixDNA聚合酶具有高保真、高灵敏度、高延伸速度等特点,可合成长达6kb的PCR产物。

 

产品特点

1、高保真、高产量、高灵敏度

2、多基因检测

3、可轻松应对复杂的二级结构RNA模板

4、使用方法简便灵活,可获得大量cDNA,以便其他实验使用


实验案例

1μg 人类白介细胞总RNA用BioRT逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(两步法)进行RT-PCR后电泳结果。

 

图8

在结合实验的基础上,根据不同试剂盒的特点选择试剂,往往事半功倍!

 

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